hongos tratamiento_3

hongos tratamiento_3

Biocontrol del moho Blatt- del tomate Cladosporium fulvum empleando cuatro hongos antagonistas

Biocontrol der Blattform von Tomaten Cladosporium fulvum (Cooke 1883) vier antagonistischen Pilzen beschäftigt

Biocontrole tun MoFo Blatt- em tomateiro empregando Quatro fungos antagonistas

Enrique Torres I, III; José Iannacone I, II, *; Hilda Gomez III

Ich Universidad Nacional Federico Villarreal. Facultad de Ciencias Naturales y Matemáticas. Laboratorio de Ecofisiologíein Tier. Calle San Marcos 383, Pueblo Libre. Lima, Perú
II Universidad Ricardo Palma. Facultad de Ciencias BiolóGicas. Av. Benavides s / n, Santiago de Surco. Lima, Perú. E-mail: joseiannacone@yahoo.es
III Laboratorio de Hongos Antagonistas. Programa Nacional de Control Biológico, Servicio Nacional de Sanidad Agraria (PNCB-SENASA)

El moho Blatt- Cladosporium fulvum (Cooke 1883) Produzieren una enfermedad que ataca el cultivo de tomate en invernadero en el Perú. Como Alternativa al Steuer de este patógeno se probó la eficiencia bajo condiciones in vitro e invernadero de cuatro hongos antagonistas: Hansfordia pulvinata (Berk y Curt 1958), Trichoderma harzianum (Rifai 1969), T. viride (Persoon 1821) y T. virens (Miller, Giddens y Foster 1963). El cultivo y crecimiento de los hongos se Ausfüh-ó en Agar Sabouraud para Trichoderma spp. y en Agar Jugo V8 para H. pulvinata. El bioensayo empleado fue el de placas precolonizadas propuesto por Krauss. En condiciones in vitro se observó que a 24 ºC y 72 h, el crecimiento de T. harzianum fue Estadísticamente diferente de las otras tres especies ensayadas, y 28 ºC fue ein ähnlich ein T. viride. A 24 ºC y a las 120 h, T. virens fue diferente de Todas las espécies evaluadas. A las 168 h el crecimiento de las tres especies de Trichoderma fue Estadísticamente ähnlich, diferenciándose de H. pulvinata. A 28 ºC a las 120 h y 168 h los resultados fueron Estadísticamente similares para las tres especies de Trichoderma, pero diferentes de H. pulvinata. El mecanismo de acción más común para los hongos antagonistas fue el micoparasitismo. Finalmente, T. harzianum fue más eficiente debido a que redujo la severidad de la enfermedad en un 19,35% bajo condiciones de invernadero.

Palabras clave:Cladosporium fulvum, Steuer biológico, Hansfordia pulvinata , tomate, Trichoderma harzianum, Trichoderma viride, Trichoderma virens.

Blattform Cladosporium fulvum (Cooke 1883), Produzieren Eine Tomate Pflanzenkrankheiten im Gewächshaus in Peru. Als Alternative of this Erregers zu steuern sterben Effizienz unter in vitro Bedingungen und Gewächshausbedingungen von vier antagonistischen Pilzen Würde sondiert: Hansfordia pulvinata Berk y Curt 1958, Trichoderma harzianum (Rifai 1969), T. viride (Persoon 1821) und T. virens (Miller, Giddens y Foster 1963). Pilzkultur und das Wachstum in Würde Agar Sabouraud durchgeführt für Trichoderma spp. und in Agar Juice V8 Pelz H. pulvinata. Der Bioassay beschäftigt Krieg vorbesiedelt Platten vorgeschlagen von Krauss. Ich bin in vitro Bedingungen bei Wurde 24 ° C und 72 h Beobachtet that der Wachsende T. harzianum Krieg statistisch anders als other drei ArTeN getestet und bei 28 ° C war ähnlich sterben T. viride. Bei 120 h und 24 ° C Anbau von T. virens unterschied Sich von allen untersuchten ArTeN. Bei 168 h wächst der drei ArTeN von Trichoderma. statistisch ähnlich Waren, variierend von H. pulvinata. Bei 28 ° C und bei 120 h und 168 h Waren sterben ergebnisse statistisch ähnlich zu den drei ArTeN von Trichoderma. Aber anders H. pulvinata. Micoparasitism Ist Die häufigste-Wirkungsmechanismus. Endlich, T. harzianum Krieg der effizienteste antagonistischen Pilz wegen Krankheit in 19,35% unter Gewächshausbedingungen REDUZIERT.

Schlüsselwörter: Biologische Kontrolle, Cladosporium fulvum, Hansfordia pulvinata. Tomaten, Trichoderma harzianum, Trichoderma viride, Trichoderma virens.

O mofo Blatt- Cladosporium fulvum (Cooke, 1883) produz uma enfermidade que ataca o cultivo tun tomateiro em casa de Vegetação no Peru. Como alternativa ao controle desse patógeno, TestOU-se ein eficiência, schluchzen Bedinções in vitro e casa de vegetatção, de Quatro fungos antagonistas: Hansfordia pulvinata (Berk y Curt 1958), Trichoderma harzianum (Rifai 1969), T. viride (Persoon 1821) y T. virens (Miller, Giddens y Foster 1963). O cultivo e crescimento dos fungos foi realizado em Agar Sabouraud para Trichoderma spp. e em Agar Suco V8 para H. pulvinata. O bioensaio empregado foi o de placas pré-colonizadas proposto por Krauss. Em Bedinções in vitro. observou-se que a 24 ° C e 72 horas, o crescimento de T. Harzinum foi estatisticamente diferente das outras três espéCIES estudadas, e ein 28 ° C foi semelhante ein T. viride. A 24 ° C e 120 horas, T. virens foi diferente de Todas as espéCIES avaliadas. A 168 horas, o crescimento das três espéCIES de Trichoderma foi estatisticamente semelhante, diferenciando-se de H. pulvinata. A 28 ° C e 120 e 168 horas, os resultados foram estatisticamente semelhantes para als três espéCIES de Trichoderma. mas diferentes de H. pulvinata. O mecanismo de ação mais comum para os fungos antagonistas foi o micoparasitismo. Finalmente, T. harzianum foi mais eficiente devido à redução da severidade da enfermidade em 19,35% sob Bedinções de casa de VegetaçãO.

Palavras-chave: Cadosporium fulvum, controle biológico, Hansfordia pulvinata. tomate, Trichoderma harzianum. Trichoderma viride. Trichoderma virens.

El Tomate (lycopersicum esculentum Mühle) es una de las especies agríColas más conocidas y exportadas comercialmente ein nivel mundial. Esta especie es una de las hortalizas de Bürgermeister importancia para el consumo humano directo (Iannacone y REYES, 2001; DE WIT et al 2002 ;. Iannacone y MURRUGARRA, 2002).

Dentro del aspecto fitosanitario, el cultivo del tomate es afectado por diversas plagas y enfermedades. Los patógenos que afectan la parte aérea del tomate Sohn muy diversos y variados, muchos de ellos pueden ocasionar pérdidas muy Severas si no se toman las medidas de control adecuadas (APAZA, 1999;. REY et al, 2000). Una de estas enfermedades es la cladosporiosis, conocida como Moho Blatt- del tomate, cuyo agente etiológico es Cladosporium fulvum (COOKE, 1883; sin. Fulvia fulva). (GABOR y WIEBE, 1997; JOOSTEN y DE WIT, 1999). El moho Blatt- es una enfermedad que se encuentra normalen atacando este cultivo bajo condiciones de invernadero (ELAD, 2003). En Ataques Gräber gran parte de la superficie Blatt- queda inutilizada para realizar la fotosíntesis, lo que se traduce en un descenso en el rendimiento y en la calidad del fruto (DE WIT et al. 2002).

Una alternativa dentro del Steuer biológico es el Empleo de hongos antagonistas, cuyo conocimiento de su efectividad y de su mecanismo de acción es esencial para el Desarrollo de una estrategia en la implantación de una agricultura sostenible (PERESE Y LE PICARD, 1980; Honee et al 1994; .. MARTINEZ et al 1994; Guarro et al 1999 ;. Lieckfeldt et al 1999 ;. SELITRENNIKOFF, 2001; WILLIAMS et al 2003) .. El Steuer biológico utilizando micoparáSITOS, Wieí como cepas fúngicas del genero Trichoderma para el Steuer de enfermedades de plantas producidas por hongos, constituye hoy en día una alternativa que podrísustituir ein el Kontrolle quíMico sintético, que además de su elevado costo, trae como consecuencia el Desarrollo de Resistencia por parte del fitopatógeno, y problemas de contaminación y toxicidad (GRONDONA et al 1997 ;. CASTLE et al 1998 ;. REY et al 2000 ;. RodrÍGUEZ, 2002). Además es una estrategia que está dando buen resultado contra los agentes infecciosos al desplazar ein éNatürliche stos de manera (PAPAVIZAS 1985; HERMOSA et al 2000 ;. REY et al 2000; .. SANTAMARINA et al 2002).

Diferentes especies del género Trichoderma han sido usadas como agentes de control biológico de enfermedades en la agricultura (LO et al 1997 ;. KLEIN y Eveleigh, 1998; HERMOSA et al 2000; .. Saria et al 2005). Los más utilizados Sohn Trichoderma harzianum (RIFAI 1969), T. viride (PERSOON 1829) y T. virens (J. MILLER, GIDDENS & FOSTER 1963) (Samuels, 2004). Se ha demostrado que son capaces de controlar significativamente bajo condiciones in vitro ein hongos de diversos géneros, como Armillaria (VAHL), Botrytis (PERSOON 1801), Chondrostereum ( PERSOON 1801), Colletotrichum (SACC 1901), Diaporthe (WOLF), Endothia (Murris), Fulvia (CIFERRERI), Fusarium (LINK ex GRAY 1821), Fusicladium (SACC 1901), Helminthosporium (LINK 1821), Pseudoperonospora (BERK & CURT), Pythium (Pringsh), Rhizoctonia (KÜHN), Rhizopus (CORDA 1838), Sclerotinia (SACC 1901), Sclerotium (SACC 1901), Venturia (SACC 1901) y Verticillium (NEES 1817) (Guarro et al 1999 ;. HERMOSA et al 2000 ;. SANTAMARINA et al 2002 ;. GIELEN et al 2004 ;. Samuels, 2004). Además, Hansfordia pulvinata Berk y Curt 1958, se le ha encontrado parasitando al hongo C. fulvum en cultivo de tomate (PERESSE y LE PICARD, 1980).

Los objetivos especíFICoS de la presente investigación fueron: 1) evaluar la efectividad y el tipo de acción de cuatro especies de hongos antagonistas: Hansfordia pulvinata. Trichoderma harzianum. T. viride y T. virens sobre C. fulvum en condiciones in vitro, 2) abzuschrecken la temperatura óptima a la cual se Beob el mejor efecto de los cuatro hongos antagonistas Frente al patógeno C. fulvum bajo condiciones in vitro. y 3) identificar el efecto de cuatro hongos antagonistas sobre la severidad de la enfermedad cladosporiosis, bajo condiciones de invernadero.

2. MATERIAL Y MÉTODOS

El presente trabajo de investigación se Ausfüh-ó durante los meses de Agosto del 2003 ein febrero del 2004 en el Laboratorio de Hongos Antagonistas y en el invernadero del Programa Nacional de Control Biológico- Servicio Nacional de Sanidad Agraria (PNCB- SENASA), con sede en Vitarte, Lima, Perú.

Se utilizaron cuatro cepas de hongos antagonistas, proporcionadas por Laboratorio de Hongos antagonistas del PNCB-SENASA y una cepa patogénica C. fulvum. que se AISLó a partir de Hojas con signos de la enfermedad (Tabla 1).

Prueba de patogenicidad. Con la finalidad de reactivar y aislar el patógeno se procedió ein realizar una prueba de patogenicidad. Se asperjó 50 ml de una Lösung ²ón madre de 10 8 esporas mL -1 del cultivo de C. fulvum procedente de Ica sobre folíolos de plantas sanas de tomate, las cuales fueron incubadas ein temperatura ambiente (24 ºC Eine 28 ° C) y 70% Eine 85% de humedad relativa (HR) hasta la Aparición de los primeros síntomas ocasionados por el patógeno (a los 14 a 16 díwie). Seguidamente se recolectaron las hojas que presentaron el daño, y se transportaron al Laboratorio para identificar el patógeno. La identificación de C. fulvum se basó en la morfologíein en cultivo, en las Höfeísticas de las conidias y del micelio, y en la sintomatología del patógeno en el cultivo de tomate (Thomma et al.. 2005). Se procedió a su reaislamiento por una puntura a un medio de cultivo Einer Base de Agar de Sabouraud (Merck, 2000). Se incubaron 24 ° C y 60% de HR Durante 15 díWie hasta que la superficie del medio fue colonizada por el patógeno. No se Ausfüh-ó ninguna determinación de razas fisiolóGicas de C. fulvum empleando técnicas moleculares (Thomma et al. 2005).

Multiplicación: El Hongo C. fulvum fue sembrado y multiplicado a partir de 10 ml de una Lösung ²ón madre. De esta dilución, se tomaron 7 gotas, las cuales sich einñadieron ein placas de Petri, con el fin de Extender el inóculo por toda el área de la Placa utilizando el asa de Drigalski. Las placas conteníein un medio de Agar de Sabouraud Dextrosa + Glucosa (Merck, 2000); seguidamente fueron llevados a la incubadora ein 24ºC y 65% ​​de HR por un periodo de 15 díWie hasta que la superficie del medio fue cubierta totalmente por el hongo patógeno. Al tener las Placas Totalmente colonizadas, éStas se utilizaron para la confrontación con los hongos antagonistas.

Multiplicación. Para multiplicar los hongos antagonistas T. harzianum, T. viride y T. virens, se cultivaron por puntura en placas Petri con Agar Sabouraud Dextrosa. El Hongo H. pulvinata por sus requerimientos fue sembrado por el método de agotamiento y en un medio V8. Se incubaron aus 10 díals 24ºC y 28ºC con 65% de HR. A partir de estas placas se tomaron tiras de cultivo de 5 x 25 mm que fueron colocadas en el interior de las placas precolonizadas con C. fulvum y se incubaron Durante 7díwie, donde se Evaluó la interacción antagonista-patógeno. Las tres especies de hongos antagonistas pueden vivir en conjunto en el suelo. No se Ausfüh-ó ninguna determinación de razas fisiolóGicas de los tres hongos antagonistas empleando técnicas moleculares (CASTLE et al. 1998).

Interacción antagonista — patógeno

Prueba in vitro : Se Evaluó la interacción de los cuatro hongos elegidos: T. harzianum, T. viride, T. virens y H. pulvinata Frente al patógeno C. fulvum, con cinco repeticiones cada una. El método empleado para este ensayo fue el de las placas precolonizadas según Krauss et al. (1999). Se utilizaron placas de Petri de 100 x 10 mm con Agar Sabouraud Dextrosa + Glucosa conteniendo ein C. fulvum. de 16 díWie de incubación, seguidamente. Se cortaron tiras de 5 x 25 mm de otras placas que conteníEin el crecimiento activo de los hongos antagonistas. Estas tiras fueron colocadas en forma invertida sobre un extremo de las placas que contenía al patógeno C. fulvum, de tal manera que entraran en contacto las hifas de las dos especies de hongos. Seguidamente, se incubaron ein 24ºC y 28ºC con 65% de HR. Se midió el Halo de crecimiento del hongo antagonista sobre el patógeno y el PORCENTAJE de área ocupada (PAO) de la siguiente manera: cada placa precolonizada con el patógeno y su correspondiente tira de 5 x 25 mm que conteníein al micoparásito, fue colocada sobre una Sohlen A, la cual estaba constituida por 5 columnas y 17 filas con un ancho de 5 mm de tal modo que se formaran celdas de 25 mm 2. Esta Sohlen fue colocada teniendo en cuenta que el 0 coincidiera con la tira del inóculo inicial. En la Placa colonizada con la Basis sobre la Sohlen se Ausfüh-ó El Corte de la primera Columna; seguidamente se realizaron cortes transversales con la finalidad de obtener 15 cuadrículas de 5 x 5 mm. Cuando se efectuó la incisión, ésta se hizo desde el margen distalen del antagonista con ayuda de un bisturí Europäische Sommerzeitéril. Cada bloque obtenido fue transferido con ayuda de un asa Bacteriológica hacia una placa vacíein estéril; en la base de esta se observó una Sohlen B Numerada del 0 bis 15 ein manera de espiral. Los bloques transferidos se colocaron en orden descendente, de tal forma que esto sirvió de referencia para poder abschrecken el área ocupada por el antagonista. En la Tapa interna de la Placa, se colocó 1 Disco de Papel toalla estéril de 100 mm de diáU-Bahn, humedecido con 1 ml de agua destilada estéril (ADE) para brindar humedad. Posteriormente, se incubó Durante 24 h, y se Evaluó el Desarrollo del antagonista sobre el patógeno. Las hifas del antagonista se observaron con el microscopio compuesto a un aumento Gesamt de 400 X.

Prueba in vivo . Para el experimento se utilizaron plantas de tomate de la variedad " Río Grande" de 100 díWie de Desarrollo fenológico. Para la obtención de las plántulas de tomate, se germinaron semillas de tomate Var. Río Grande utilizando Cajas de Warenkorbón de 30 x 18 cm; como sustrato se utilizó arena fina de ríO. En este sustrato se sembraron las semillas. Luego de 30 díWie de la germinación se Transplantationó ein maceteros de 20 cm de diáU-Bahn-con un sustrato mixto Einer Basis de tierra de cultivo y Arena de río (1: 2).

En el invernadero se colocaron seis cubos de 1m 3. Estos cubos estuvieron protegidos con una malla anti-afídica. Dentro de estos cubos se encontraron cada uno de los tratamientos. La HR fue de 75% y la temperatura fluctuó entre 28 ° C y 30 ºC. La inoculación del patógeno C. fulvum se Ausfüh-ó en forma directa sobre los foliolos de la Planta de tomate usando un asperjador; se utilizó una dilución de agua más Tween 80 al 0,1% que contuvieron las conidias ein una concentración de 10 5 esporangios mL -1. El patógeno C. fulvum keine Produzieren zoosporas. Posteriormente a la inoculación del patógeno las plantas fueron asperjadas con agua blanda, tres veces al díein para favorecer la penetración del hongo patógeno. 24 h Después de aplicar el patógeno se Ausfüh-ó la aplicación de los hongos antagonistas alsí como el tratamiento de Kontrolle quíMico Siguiendo las recomendaciones de BETALLELUZ (2003). Las aplicaciones de los hongos antagonistas fueron realizadas por aspersión al igual que la del patógeno. Los tratamientos para este experimento fueron seis, empleándose seis plantas por tratamiento: un quíMico TILT® 250 CE (Propiconazol 0,63 g IA L -1), cuatro antagonistas, y un testigo (agua blanda lt; 180 mg de CaCO3 L -1). La primera aplicación se Ausfüh-ó a las 24 h Después de haber aplicado el patógeno. Esta aplicación se llevó ein Cabo de forma Dirigida hacia el envés de las hojas, utilizando asperjadores de 500 ml de capacidad. El Hongo antagonista que se encontraba de Placa fue suspendido de agua, la cual conteníein Tween 80 al 0,1% para permitir einem las conidias encapsular. La concentración de los hongos antagonistas para aplicar fue de 10 8 esporas mL -1 Siguiendo las recomendaciones de BETALLELUZ (2003). A cada tratamiento se le aplicaron 250 ml del inóculo, aproximadamente 41,6 ml por planta. Por ende, se emplearon 6 plantas por tratamiento. Seguidamente los tratamientos se mantuvieron en el invernadero a una temperatura promedio de 24 a 28 ° C y HR de 75%.

Evaluación in vitro: Se realizaron cuatro evaluaciones que consistieron en la determinación del Halo de crecimiento interdiario del antagonista sobre el patógeno. Este Dato Provino de la Lectura de cada cuadrícula de 25 mm 2. que contenía al patógeno con presencia de hifas del antagonista y la posición numérica que este OCUPó en la Sohlen (B). Seguidamente se multiplicó la posición numérica que ocupaba el antagonista sobre el patógeno por la distancia recorrida por éste que Ära de 5 mm. Por lo tanto, al final se obtuvo el Halo de crecimiento interdiario de cada antagonista, a dos temperaturas y a cuatro periodos de incubación (24 a h 168 h). Estos mismos datos sirvieron para abschrecken el PORCENTAJE de área ocupada por el antagonista (PAO).

Evaluación in vivo. Se realizaron cada siete díals Después de la inoculación del patógeno. Para la evaluación de la severidad se tomaron tres hojas del tercio medio de la Planta de tomate y se Schätzó el nivel de dañO. Se determinó la severidad de daño ein nivel Blatt- (Tabla 2), según la escala modificada mencionada por Campbell et al. (1990). Cada tratamiento consistió en seis macetas con una planta cada una, con un total de 18 hojas por tratamiento. Con el PORCENTAJE de área Blatt- dañada se procedió ein estimar el área bajo la curva del Progreso de la enfermedad (PE) Medi la siguiente fórmula:

donde: n = es el número de Mediciones, Yich = El PORCENTAJE de severidad de la enfermedad en el día de la medición i, tich = El número de díals Después de la inoculación a la fecha de la medición i. Seguidamente se grafischemó El Progreso de la enfermedad y se determinó el PORCENTAJE de área reducida (Ar) usando la siguiente fórmula:

Ar = (AAT / AAtr) * 100

Pruebas in vitro: Para probar la efectividad de cada hongo antagonista se tuvo cinco repeticiones por cada tratamiento y se Ausfüh-ó un einálisis de varianza (ANDEVA) ein cada temperatura (24ºC y 28 ° C). Además, para abschrecken la significancia entre tratamientos se Ausfüh-ó la prueba de Tukey.

Pruebas en condiciones de invernadero: Se tuvo en cuenta una sola temperatura y para la probar eficiencia de cada tratamiento se tuvo 18 repeticiones, las cuales fueron sometidas a un ANDEVA, en donde los datos obtenidos se transformaron a la raíz cuadrática (+ 0,5), para Posteriormente ser sometidos ein una prueba de Tukey.

3. Resultados Y DISCUSIÓN

Se muestran los PAO de los hongos antagonistas sobre las placas precolonizadas del patógeno C. fulvum 24 Durante ein 168 h de evaluación y a una temperatura de 24 ºC (Tabla 3). Ein 24 ºC y eine 72 h, el PAO de T. harzianum fue Estadísticamente diferente de las otras tres especies ensayadas. Wieí mismo se observó que a las 120 h, T. harzianum y T. viride tuvieron un PAO Estadísticamente igual, diferenciándose de T. virens y H. pulvinata (Tabla 3). A las 168 h se observó que T. harzianum y T. virens lograron colonizar La Placa de un 100% sobre el patógeno que fue inicialmente sembrado (Tabla 3). Al realizar las medidas de crecimiento diario de los hongos antagonistas sobre el patógeno se tuvo como que resultados T. virens, T. harzianum y T. viride. tuvieron un promedio de crecimiento miceliar de 16, 15,8 y 15,6 mm Durchmesser -1. respectivamente, mientas el crecimiento miceliar de H. pulvinata fue 4,2 mm Ø -1.

Se observó que a una temperatura de 28 ºC y a 72 h de evaluación, el crecimiento de T. harzianum y T. viride fue Estadísticamente ähnlich. A 120 h, los hongos T. harzianum, T. viride y T. virens lograron ocupar el 100% del área de la Placa colonizada con el patógeno inicialmente, siendo las tres especies de Trichoderma, diferentes de H. pulvinata (Tabla 4).

Al evaluarse la curva de crecimiento diaria de las especies ensayadas ein temperatura constante de 24ºC, se obtuvo que los hongos del genero Trichoderma formaban un Halo de crecimiento en forma acelerada, colonizando La Placa de cinco díWie con 85, 80 y 60 mm respectivamente para T. harzianum, T. viride y T. virens ein diferencia del antagonista H. pulvinata y el patógeno C. fulvum. que tuvieron un desarrollo de 10,5 y 8 mm respectivamente Alsí mismo, ein 28 ºC el crecimiento diario de estos hongos antagonistas se SCHRITTó obteniéndose que en cinco díWie T. harzianum, T. viride y T. virens desarrollaron un Halo miceliar de 90, 88, 80 y 15 mm respectivamente. Resultados similares obtuvo BETALLELUZ (2003), lo cual corrobora que los hongos usados ​​poseen habilidades antagónicas Frente al patógeno, debido a que Trichoderma harzianum, T. lignorum y T. viride mostraron similares capacidades antagónicas (HERMOSA et al 2000 ;. REY et al., 2000).

Las especies del género Trichoderma Sohn los antagonistas más utilizados para el Steuer de enfermedades de plantas producidas por hongos, debido a su ubicuidad, a su crecimiento r a su facilidad para ser aisladas y cultivadas,ápido en gran número de SUSTRATOS y a que no Atacan Einems plantas superiores (GRONDONA et al. 1997). Los Mecanismos por los que las cepas del género Trichoderma desplazan al fitopatógeno Sohn fundamentalmente de tres tipos: 1) competición directa por el espacio o por los NUTRIENTES, 2) producción de metabolitos antibióTicos, ya Meer de Naturaleza volátil o no volátil, y 3) parasitismo directo de determinadas especies de Trichoderma sobre el hongo fitopatógeno. Estos tres Mecanismos kein Sohn excluyentes sino que Aktúein sinergicamente en el Steuer de los patógenos. La importancia relativa de cada uno de ellos depende de cada pareja de antagonista-patógeno y de las condiciones Ambien (SPIEGEL y CHET, 1998;. HERMOSA et al 2000 ;. REY et al, 2000). Por lo tanto los resultados encontrados en la presente investigacióEin n 24 Jahre 28ºC muestran que los hongos T. harzianum T. virens y T. viride y H. pulvinata ejercieron un efecto antagónico sobre el patógeno C. fulvum Medi el mecanismo de acción tipo micoparasitismo, kein pudiendo observarse otro tipos de Mecanismos. BETALLELUZ (2003) menciona que T. harzianum, T. viride. T. virens y T. lignorum contra P. infestans ejercieron un antagonismo ein través de diferentes Mecanismos de acción como el micoparasitismo y la Antibiose que se vieron afectados por la temperatura. Wieí mismo RodrÍGUEZ y Arcia (1993) mencionan que las temperaturas óptimas para el crecimiento de Trichoderma spp. se encuentra entre 25 a 30 ºC. Con respecto al micoparasitismo fue el mecanismo que se pudo observar, debido que las cuatro especies ensayadas crecieron sobre el patógeno colonizándolo rápidamente y degradando sus Paredes, Medi posibles actividades enzimáticas las que anteceden al micoparasitismo (REY et al 2000 ;. WILLIAMS et al 2003) .. Esos autores quienes mencionan que el micoparasitismo es el Haupt mecanismo de acción de Trichoderma. en la cual envuelve a su hospedero y secreta enzimas que degradan La Pared celular, luego continua la retracción de la Membrana plasmática y la desorganizaci finalmenteón del citoplasma. Las principales enzimas degradadoras de polímeros por parte de Trichoderma son las quitinasas, glucanasas y proteasas (REY et al. 2000). Este micoparasitismo de La Pared celular se observó y corroboró al analizar las muestras en el microscopio.

Wieí mismo, STEFANOVA et al. (1999) señalan que en la actividad MetabóLica en el ámbito Celular de las cepas de Trichoderma spp. para el Steuer de fitopatógenos de suelo, los metabolitos producidos por los Trichoderma spp. causaron vacuolación, granulación, desintegración y lisis de La Pared celular, lo cual posiblemente Haya ocurrido en el ensayo de interacción entre los tres hongos del género Trichoderma y H. pulvinata contra el patógeno C. fulvum. HOWELL (1982) menciona que las hifas de Rhizoctonia solani Künh fueron parasitadas por T. virens sin mostrar evidencia de Antibiose. De la misma forma en el presente trabajo, al ser confrontadas las cuatro especies antagónicas contra el patógeno no se logró evidenciar el mecanismo de acción tipo Antibiose (Calistru et al. 1997). Se observó una interacción directa entre el antagonista y el patógeno siendo como consecuencia del micoparasitismo (EZZIYYANI et al. 2004).

Con respecto a la sintomatología de la enfermedad, se observó la Aparición de pequeñals manchas de color amarillo sobre los haces de las hojas en el díein dieciséist Después de la inoculación, a una temperatura de 28 ± 2 ° C y una HR de 75%.

Los resultados de la interacción entre antagonistas y patógeno bajo condiciones de invernadero Sohn señalados en la Tabla 5. Los resultados obtenidos entre los tratamientos Sohn iguales Estadísticamente entre la primera y quinta evaluación. Por otro lado, a los 42 días (sexta evaluación) Después de la inoculación del patógeno, T. harzianum y el Kontrolle quíMico fueron Estadísticamente diferentes de H. pulvinata y el Kontrolle. Wieí mismo T. harzianum. CQ, T. virens y T. viride Sohn iguales Estadísticamente. De la misma forma, HERNÁNdez et al. (1999), mencionan que en el Kontrolle apikal de la guayaba ocasionada por Dothiorella sp el uso de T. harzianum kein MOSTRó diferencias Estadísticas en relación al producto quíMico de comparación. Otros AUTORES han encontrado resultados que reflejan ausencia de efecto por parte de T. harzianum sobre la incidencia de la enfermedad pudrición carbonosa Macrophomina phaseolina (Tassi) GoID. (CARDONA y RODRIGUEZ, 2006). En Contraste, EZZIYYANI et al. (2004) indicaron un alto efecto de H. harzianum. pues ha sido capaz de reducir en un 65% la " tristeza" causada por Phytophthora capsici en plantas de pimiento Capsicum annuum L.

Vagas (1984) señala que T. harzianum en el Steuer de Mycena citricolor fue menos eficiente en comparación con la mezcla de T. harzianum + CoBox (oxicloruro de Cobre), ya que se obtuvo resultados Estadísticamente similares en la reducción del patógeno. Con respecto a la reducción de la enfermedad se obtuvo que T. harzianum a la sexta evaluación redujo la enfermedad en relación al testigo en un 19,35%. De manera ähnlich se observó que el tratamiento con el quíMico (Propiconazol) redujo la enfermedad en un 17,25%, nivel promedio de control de este quíMico sobre C. fulvum. Estas diferencias aunque resulten ser míNimas numéricamente, Indican que el uso de microorganismos antagónicos para el Steuer de fitopatógenos resulta una alternativa en el Steuer biológico de fitoenfermedades. BETALLELUZ (2003) señaló que T. harzianum kein fue el hongo antagonista con Bürgermeister capacidad para reducir la enfermedad, por lo contrario el hongo que manifestierenó Bürgermeister capacidad de reducir la enfermedad del tizón tardío (P. infestans ) fue T. viride. Ante esto cabe señAlar que ACEVEDO y Arcia (1988) hacen mención, con respecto a la capacidad antagonista de Trichoderma spp. que ésta dependerá de la cepa, y por ello existen aislamientos más eficientes para el Kontrolle de un patógeno que para otro. Se ha evaluado el uso de hongos antagonistas en condiciones de laboratorio sobre Phytophthora infestans (Mont 1973), encontrándose que T. lignorum Persoon 1801 Cubrió un 80% de la Placa de precolonización en cinco díWie seguido por T. harzianum con 70%, T. viride con 63,3% y T. virens con 58,75%. Además en invernadero el mejor resultado se obtuvo con T. viride. observándose una reducción de la enfermedad en un 62% en comparación con el quíMico, que redujo la enfermedad en un 88% 10 díals Después de la aplicación (BETALLELUZ, 2003).

Por otro lado al observar los resultados con respecto a los tratamientos T. viride y T. virens éstos muestran una reducción, de la enfermedad, respectivamente, de 12,33% y 14,79%, lo cual hace suponer que los hongos antagonistas se han establecido sobre el daño ocasionado por la enfermedad. Sin Embargo su agresividad en invernadero difiere de los resultados encontrados en las pruebas de laboratorio, en donde se encontró que los tres hongos del género Trichoderma Tienen una acción agresiva sobre el patógeno C. fulvum Llegando Eine crecer y colonizarlo rápidamente (Tablas 3 Al 5).

H. pulvinata MOSTRó resultados similares al testigo siendo un microorganismo antagónico deficiente para el Steuer de la enfermedad. Esto pudiera deberse ein que este antagonista kein tuvo la capacidad de adaptación y crecimiento sobre el patógeno. Además se observó que el Desarrollo de la enfermedad fue Bürgermeister en el testigo con 2170,23 unidades de área bajo la curva del Progreso de la enfermedad (PE), seguida del tratamiento con el antagonista H. pulvinata. con 2119,6 unidades. Los que resultaron con menor desarrollo de la enfermedad fueron los tratamientos de T. harzianum y el Kontrolle quíMico con 1365,43 y 1977,5 unidades, respectivamente.

Los tres hongos del género Trichoderma presentan en general un Kontrolle del patógeno Estadísticamente ähnlich al producto quíMico Propiconazol, pero diferente al del testigo (Tabla 5). Los resultados Indican un nivel de control bajo como única estrategia para el Steuer biológico e integrado de C. fulvum. Sin Embargo el efecto de adelanto o atraso de la aplicación de los hongos antagonistas y la variación de la concentración inicial del inóculo (10 5 a 10 9 esporas mL -1) deben ser Variablen a ser analizadas en futuros estudios con los hongos del género Trichoderma para el Steuer de C. fulvum.

1. Las temperaturas de 24 ° C y 28ºC permitieron el crecimiento óptimo de los cuatro hongos ensayados y una buena interacción antagónica eficiente Frente al patógeno Cladosporium fulvum.

2. 24 ° C, Trichoderma harzianum y Trichoderma virens tuvieron un Bürgermeister PORCENTAJE de área ocupada contra el patógeno C. fulvum.

3. A 28 ºC, Trichoderma virens tuvo un Bürgermeister PORCENTAJE de área ocupada contra el patógeno C. fulvum.

4. En la interacción antagonista — patógeno en condiciones in vitro se concluye que el micoparasitismo posiblemente es el Haupt mecanismo de acción.

5. Bajo condiciones de invernadero, el hongo antagonista más eficiente para el Steuer de la cladosporiosis fue Trichoderma harzianum al reducir la severidad en 19,35%.

Ein Alfonso Lizarraga, ein Yuri Calle, ein Whilly Soberanis y a todos los que Forman parte del equipo de trabajo del PNCB SENASA por su apoyo desinteresado en la realización de la presente investigación.

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Recibido para publicación el 5 de Mayo de 2004 y aceptado el 5 de julio de 2007.

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